蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定檢測(cè)服務(wù)

常見問題

1.用的什么蛋白酶酶切呢？

一般用的是胰蛋白酶或者胃蛋白酶，如果您這邊指定也是可以的，自行提供也可以。

2.比對(duì)UniProt數(shù)據(jù)庫可以嗎？

我們比對(duì)的就是UniProt數(shù)據(jù)庫。

儀器簡(jiǎn)介

測(cè)試簡(jiǎn)介：蛋白質(zhì)譜技術(shù)簡(jiǎn)單來說就是一種將質(zhì)譜儀用于研究蛋白質(zhì)的技術(shù)。它的基本原理是蛋白質(zhì)經(jīng)過蛋白酶的酶切消化后成肽段混合物，在質(zhì)譜儀中肽段混合物電離形成帶電離子，質(zhì)譜分析器的電場(chǎng)、磁場(chǎng)將具有特定質(zhì)量與電荷比值（即質(zhì)荷比，M/Z）的肽段離子分離開來，經(jīng)過檢測(cè)器收集分離的離子，確定每個(gè)離子的M/Z值。經(jīng)過可分析出每個(gè)肽段的M/Z，得到蛋白質(zhì)所有肽段的M/Z圖譜，即蛋白質(zhì)的一級(jí)質(zhì)譜峰圖。離子選擇裝置自動(dòng)選取強(qiáng)度較大肽段離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，輸出選取肽段的二級(jí)質(zhì)譜峰圖，通過和理論上蛋白質(zhì)經(jīng)過消化后產(chǎn)生的一級(jí)質(zhì)譜峰圖和二級(jí)質(zhì)譜峰圖進(jìn)行比對(duì)而鑒定蛋白質(zhì)。常用的方法是利用蛋白酶（包括胰蛋白酶、胃蛋白酶等，可指定）將大分子的蛋白質(zhì)酶解成小分子的肽段，再過濾膜(3KD)后進(jìn)入LCMSMS進(jìn)行分析，樣品被離子化后進(jìn)入質(zhì)譜儀，得到一級(jí)質(zhì)譜圖后，篩選母離子進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜圖解析肽段序列。最后綜合分析比對(duì)得出蛋白質(zhì)的一級(jí)氨基酸序列。

樣品要求

1.常見樣本：常規(guī)動(dòng)物組織（心、肝、脾、肺、腎、腸、腦、肌肉等）、葉、花、果實(shí)、種子，組織推薦送樣量：≥ 200mg；

2.膠點(diǎn)肉眼可見，要求條帶清晰，無降解；膠條推薦送樣2管；

3. 蛋白溶液 500ul,蛋白粉末1mg

4.寄送方式：組織或蛋白液干冰寄送；膠條或膠點(diǎn)常溫或冰袋寄送

5.前處理方法：常規(guī)動(dòng)物組織建議方法：PBS洗滌去除殘留血液和污染物，并迅速剔除組織表面的筋皮及脂肪等結(jié)締組織，用手術(shù)剪將組織剪成1cm3 左右的小塊（約花生米般大?。瑢⒔M織塊裝入凍存管中，旋緊蓋子。迅速置于液氮冷凍5min，之后轉(zhuǎn)移至-80℃ 保存，干冰運(yùn)輸；

植物組織建議方法：在與研究目的不沖突的前提下，盡量選取新鮮、幼嫩、生長(zhǎng)狀態(tài)良好的組織部位。如樣品表面污漬較多，在采集之前用無菌水擦拭或沖洗干凈，再用吸水紙吸干樣品表面殘留液體。取樣后馬上放入凍存管或者干凈的錫箔紙內(nèi)，液氮速凍，-80℃保存，干冰運(yùn)輸；

膠點(diǎn)建議方法：用移液槍頭將2D點(diǎn)挖下來，加入已裝有超純水的離心管中；膠條建議方法：電泳完后用R250染色。請(qǐng)不要使用G250染色，因?yàn)楹笃诿撋桓蓛?，易產(chǎn)生污染。將需要鑒定的SDS-PAGE條帶切下，裝進(jìn)1.5mL離心管中，每切一個(gè)條帶，清洗刀片，避免小碎膠的污染。常溫或冰袋寄送，顏色非常淺的條帶可取多個(gè)重復(fù)樣品放一起。