前    言

本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A、附錄B為資料性附錄。

本標(biāo)準(zhǔn)由公安部道路交通管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出并歸口。

本標(biāo)準(zhǔn)負(fù)責(zé)起草單位：天津市公安交通管理局。

本標(biāo)準(zhǔn)參加起草單位：天津市天通司法鑒定中心。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：謝金榮、沈宇明、張灝、劉洪月、蔡紅艷、劉俊芳。

血液酒精含量的檢驗(yàn)方法

1　范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了血液酒精含量的頂空氣相色譜檢驗(yàn)方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于道路交通執(zhí)法活動(dòng)中對(duì)人員血液中酒精（以下均稱乙醇）、正丙醇的定性和定量分析。

2　規(guī)范性引用文件

下列文件中的條款通過本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的新版本。凡是不注日期的引用文件，其新版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

GB19522 車輛駕駛?cè)藛T血液、呼氣酒精含量閾值與檢驗(yàn)

GA/T122－1995 毒物分析名詞術(shù)語

3　術(shù)語和定義

GB19522和GA/T122－1995中確立的術(shù)語和定義適用于本標(biāo)準(zhǔn)。

4　原理

本方法利用乙醇的易揮發(fā)性，以叔丁醇為內(nèi)標(biāo)，用頂空氣相色譜火焰離子化檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)；經(jīng)與平行操作的乙醇標(biāo)準(zhǔn)品比較，以保留時(shí)間或相對(duì)保留時(shí)間定性，用內(nèi)標(biāo)法以乙醇對(duì)內(nèi)標(biāo)物的峰面積比進(jìn)行定量分析。

5　試劑

5.1　乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液

吸取10.04mL或稱取8.008g無水乙醇標(biāo)準(zhǔn)品（含量不小于99.9%）置于100mL容量瓶中，添加重蒸餾水至刻度，混勻，得8000mg/100mL乙醇儲(chǔ)備液，將儲(chǔ)備液稀釋分別得到濃度為4000 mg/100mL、2000mg/100mL、1000mg/100mL、100mg/100mL的乙醇標(biāo)準(zhǔn)使用液。密封，冷藏保存，使用期60天。

5.2　正丙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液

吸取1.25mL或稱取1.001g正丙醇標(biāo)準(zhǔn)品（含量不小于99.9%）置于100mL容量瓶中，添加重蒸餾水至刻度，混勻，得1000mg/100mL正丙醇儲(chǔ)備液，密封，冷藏保存，使用期60天。

5.3　內(nèi)標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)溶液

吸取1.28mL或稱取1.050g叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)品（含量不小于99.5%）置于500mL容量瓶中，添加重蒸餾水至刻度，混勻，得200mg/100mL叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)使用液，密封，冷藏保存，使用期60天。

6　器材

頂空氣相色譜檢驗(yàn)方法應(yīng)具備以下器材：

a)氣相色譜儀；（國創(chuàng)儀器GC7890）

b)頂空進(jìn)樣器或恒溫加熱器；

c)樣品瓶；

d)硅橡膠墊；

e)聚四氟乙烯薄膜；

f)鋁帽；

g)密封鉗；

h)注射器。

7　操作方法

7.1　定性分析

7.1.1樣品制備

7.1.1.1 檢材制備

取0.50mL待測(cè)全血及0.10mL叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)使用液，加入樣品瓶內(nèi)，瓶口覆蓋聚四氟乙烯薄膜，硅橡膠墊，用密封鉗加封鋁帽，混勻，置頂空進(jìn)樣器或恒溫加熱器中70℃加熱15min待測(cè)。

7.1.1.2 空白檢材和添加檢材制備

取0.50mL空白全血兩份，其中一份添加5μL濃度為 100mg/100mL的乙醇標(biāo)準(zhǔn)使用液和0.10mL叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)使用液按上述方法平行操作以進(jìn)行空白對(duì)照分析和已知對(duì)照分析。

7.1.2 檢測(cè)

7.1.2.1 氣相色譜檢測(cè)參考條件

氣相色譜檢測(cè)參考條件見表1。

表1 氣相色譜檢測(cè)參考條件

7.1.2.2 頂空自動(dòng)進(jìn)樣分析參考條件：

頂空進(jìn)樣分析參考條件見表2。

表2 頂空進(jìn)樣分析參考條件

7.1.2.3 進(jìn)樣

7.1.2.3.1頂空自動(dòng)進(jìn)樣

將已制備的進(jìn)樣瓶置于頂空自動(dòng)進(jìn)樣器樣品架上，編制進(jìn)樣方法并運(yùn)行。

7.1.2.3.2頂空手動(dòng)進(jìn)樣

用注射器吸取經(jīng)恒溫加熱器加熱后樣品瓶內(nèi)液面上的氣體1.0mL,注入氣相色譜儀中。

7.1.3 記錄與計(jì)算

分別記錄各樣品中叔丁醇、乙醇標(biāo)準(zhǔn)品和可疑乙醇峰的保留時(shí)間，計(jì)算它們的保留時(shí)間平均值和樣品中乙醇相對(duì)于叔丁醇的相對(duì)保留時(shí)間值。

7.2    定量分析

7.2.1 樣品制備

7.2.1.1 檢材制備

吸取0.50mL待測(cè)全血兩份，分別加入樣品瓶內(nèi)，各加入0.10mL叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)使用液，按7.1.1密封瓶口后，混勻，置頂空進(jìn)樣器或恒溫加熱器中70℃加熱15min待測(cè)。

7.2.1.2 添加檢材制備

取0.49mL空白血液，3份，分別添加10μL濃度為1000mg/100mL，2000mg/100mL，4000mg/100mL的乙醇標(biāo)準(zhǔn)使用液得到乙醇濃度為20mg/100mL，40mg/100mL，80mg/100mL的血液樣品，再分別添加0.10mL叔丁醇標(biāo)準(zhǔn)使用液，按上述方法平行操作。

7.2.2 檢測(cè)與記錄

按7.1.2操作，記錄檢材和添加檢材中乙醇和叔丁醇峰面積值。

7.2.3 計(jì)算

7.2.3.1校準(zhǔn)曲線

用添加檢材中的乙醇與叔丁醇峰面積之比對(duì)乙醇添加含量做校準(zhǔn)曲線。

7.2.3.2 定量

利用校準(zhǔn)曲線計(jì)算檢材中的乙醇含量X（mg/100mL）。

7.2.3.3計(jì)算相對(duì)相差

兩份樣品平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)相差按下式計(jì)算：

相對(duì)相差（％）＝

式中：

X_１、X_２—為兩份樣品平行定量測(cè)定的結(jié)果；

    —兩份樣品檢測(cè)結(jié)果的平均值。

8　結(jié)果評(píng)價(jià)

8.1　定性結(jié)果評(píng)價(jià)

8.1.1　陽性結(jié)果

空白對(duì)照分析中未出現(xiàn)乙醇和叔丁醇的色譜峰為正常，出現(xiàn)乙醇或（和）叔丁醇的色譜峰，說明空白有干擾，結(jié)果無效，應(yīng)重新檢驗(yàn)；空白對(duì)照分析正常，檢材中色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間(或保留時(shí)間)與添加檢材中乙醇的相對(duì)保留時(shí)間(或保留時(shí)間)比較，誤差小于2%，經(jīng)選擇不同的色譜條件檢測(cè)，結(jié)果一致時(shí)，則認(rèn)定檢材中含有乙醇。乙醇、正丙醇和叔丁醇的氣相色譜圖參見附錄A。

8.1.2　陰性結(jié)果

已知對(duì)照分析中同時(shí)出現(xiàn)乙醇和叔丁醇的色譜峰為正常，未出現(xiàn)乙醇或（和）叔丁醇的色譜峰，說明操作有誤，結(jié)果無效，應(yīng)重新檢驗(yàn)。已知對(duì)照分析正常，檢材的叔丁醇色譜峰正常，而無乙醇的色譜峰時(shí)，則認(rèn)定檢驗(yàn)結(jié)果為陰性。

8.1.3　檢出限

本方法測(cè)定血液中乙醇的檢出限為1mg/100mL。

8.2　定量結(jié)果評(píng)價(jià)

8.2.1　校準(zhǔn)曲線

乙醇含量校準(zhǔn)曲線的線性相關(guān)系數(shù)r不小于0.999，校準(zhǔn)曲線有效。

8.2.2　定量結(jié)果

檢材的兩次測(cè)定結(jié)果的相對(duì)相差不大于15％時(shí)，測(cè)定結(jié)果有效，定量結(jié)果按兩次測(cè)定結(jié)果的平均值計(jì)算。尸體血液中乙醇含量測(cè)定結(jié)果的判定參見附錄B。

8.2.3　測(cè)定限

本方法測(cè)定血液中乙醇的測(cè)定限為5mg/100mL。所測(cè)樣品定性分析結(jié)果為陽性，定量分析乙醇含量小于5mg/100mL，檢測(cè)結(jié)果為血中檢出酒精成份，其含量小于5mg/100mL。

A

（資料性附錄）

乙醇、正丙醇和叔丁醇?xì)庀嗌V圖

A．1 乙醇、正丙醇和叔丁醇?xì)庀嗌V圖見圖A.1、圖A.2、圖A.3和圖A.4。

圖A.1 DB-ALC2毛細(xì)管柱血中酒精含量檢測(cè)色譜圖（柱1）

圖A.2 PLOT Q毛細(xì)管柱血中酒精含量檢測(cè)色譜圖（柱2）

圖A.3 GDX-102柱血中酒精含量檢測(cè)色譜圖（柱3）

圖A.4 5%Carbowax-20M/Carbopack柱血中酒精含量檢測(cè)色譜圖（柱4）

附  錄  B

（資料性附錄）

尸體血液乙醇含量測(cè)定結(jié)果的判定

B．1 尸體血液乙醇定量結(jié)果的判定

尸體血液中乙醇含量的判定應(yīng)優(yōu)先采用外周靜脈血乙醇定量結(jié)果。尸體腐敗可能生成乙醇，一般尸體腐敗產(chǎn)生乙醇的同時(shí)平行產(chǎn)生正丙醇，如果同時(shí)檢出乙醇、正丙醇，用乙醇含量減去二十倍的正丙醇含量，得到血中乙醇含量的下限。正丙醇的定性和定量檢驗(yàn)方法與乙醇相同。