9.5%狼毒素母藥

質(zhì)檢方法驗(yàn)證

甘肅省農(nóng)藥化肥產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢疫站

 編制

二零零九年八月

1、          驗(yàn)證內(nèi)容及技術(shù)指標(biāo)

驗(yàn)證內(nèi)容及技術(shù)指標(biāo)：外觀、新狼毒素A質(zhì)量分?jǐn)?shù)、pH值（4~7）、干燥減量（%，1.0）、低溫穩(wěn)定性（0±1）℃、熱貯穩(wěn)定性（54±2）

℃。

2、試驗(yàn)方法

2.1 抽樣

  按照GB/T1605中“商品原藥采樣”規(guī)定進(jìn)行。用隨機(jī)數(shù)表法確定抽樣的包裝件，終采樣量應(yīng)不少于100g。

2.2鑒別試驗(yàn)

  在相同的高效液相色譜（HPLC）操作條件下，試樣溶液某一色譜峰保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)液新狼毒素A色譜峰的保留時(shí)間的相對差值應(yīng)在1.5%以內(nèi)。

2.3新狼毒素A質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定

2.3.1 方法提要

  采用高效液相色譜外標(biāo)法，試樣以甲醇+水+乙醇為流動(dòng)相，使用C18不銹鋼色譜柱和紫外檢測器。對試樣新狼毒素A進(jìn)行高效液相分離及測定。

2.3.2試劑與溶液

  新狼毒素A標(biāo)品已知含量，≥98%；

   水：新蒸二次蒸餾水

  甲醇：色譜純

  乙酸：分析純

2.3.3 儀器

  高效液相色譜儀，具有可變波長紫外檢測器；

  色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或色譜工作站；

  色譜柱：150mm×4.6mm(id)不銹鋼柱，內(nèi)裝CapcellpakC₁₈MG5mm填充物（或具有相同柱效的其他反相色譜柱）;

過濾器：濾膜孔徑約0.45mm；

微量進(jìn)樣器：50ml；

定量進(jìn)樣閥；

超聲波清洗器；

2.3.4 色譜操作條件

流動(dòng)相：體積比y(甲醇+水+乙醇)=60:40:1

流速：0.8ml/min

柱溫:室溫（溫度變化應(yīng)不大于2℃）；

檢測波長：297mm

進(jìn)樣量：20ml

保留時(shí)間：新狼素A約6.4min

上述液相色譜操作條件，系典型操作參數(shù)?？筛鶕?jù)不同儀器特點(diǎn)，對給定的操作參數(shù)作適當(dāng)調(diào)整，以期獲得效果。

狼毒素A母液液相色譜圖

典型的新狼毒素A母藥的液相色譜圖如上。

2.3.5 測定步驟

a) 新狼毒素A標(biāo)樣溶液的配置

稱取新狼毒素A標(biāo)樣0.1g(0.0002g)于50ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度、搖勻。用移液管吸取上述溶液5ml，于另一50ml容量瓶中，用甲醇定容，搖勻。再用0.45mm濾膜過濾。

b)新狼毒素A母藥劑樣的配制

準(zhǔn)確稱取1g（至0.0002g）于100ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度、搖勻。用微孔濾膜0.45mm過濾，取濾液進(jìn)樣20ml。

c)測定

在上述色譜條件下，待儀器工作狀態(tài)穩(wěn)定后，先注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至連續(xù)兩次進(jìn)樣的峰面積（或峰高）相對偏差小于1%，按標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液順序進(jìn)行分析。

2.3.6計(jì)算

母藥新狼毒素A的質(zhì)量分?jǐn)?shù)（%）按式（1）計(jì)算：

式中：

A₁-標(biāo)樣溶液中，新狼毒素A峰面積（或峰高）的平均值；

A₂-試樣溶液中，新狼毒素A峰面積（或峰高）的平均值；

P-新狼毒素A標(biāo)樣質(zhì)量百分?jǐn)?shù)；

m₁-新狼毒素A標(biāo)樣質(zhì)量，g

m₂-試樣質(zhì)量，g

2.3.7 允許差

  兩次平行測定結(jié)果不大于1%，取其算術(shù)平均值作為測定結(jié)果。

2.4 pH值的測定

  按GB/T1601農(nóng)藥pH值的測定方法進(jìn)行。

2.5 干燥減量的測定

2.5.1儀器設(shè)備

  電熱恒溫真空干燥箱:(95±2)℃;

  真空泵

  稱量瓶：內(nèi)徑50mm，高20mm；

  干燥器

2.5.2測量步驟

  將稱量瓶入100℃±2℃烘箱中烘1h,取出置于干燥箱中冷卻至室溫，稱量（至0.0002g），重復(fù)上述步驟，直至稱量瓶恒重為止。在瓶內(nèi)放置10g試樣，鋪平，稱量（至0.0002g），將稱量瓶放入烘箱不加蓋，開啟真空干燥烘1h，真空度為0.070pa。取出放入干燥器中，稱重。

2.5.3 計(jì)算

  以質(zhì)量分?jǐn)?shù)表示的式樣加熱減量X₂（%）按式（2）計(jì)算：

（2）

式中：

   m₃——試樣的重量

   m₄——試樣和稱瓶，g；

m₅——試樣和稱量瓶烘干后的重量，g.

2.5.4 允許差

  兩次平行測定結(jié)果之相對偏差應(yīng)不大于10%。取其算數(shù)平均值為測定結(jié)果。

2.6 低溫穩(wěn)定性

2.6.1方法提要

  試樣在0℃保持1h，記錄有無固體和油狀物析出，繼續(xù)在0℃貯存7d，離心，將固體析出物沉降，記錄其體積。

2.6.2 儀器

  制冷器：保持（0±2）℃；

  離心管：100ml,管底刻度至0.05ml;

  離心機(jī)：與離心管配套。

2.6.3 實(shí)驗(yàn)步驟

  取（100±1.0）ml試樣加入離心管中，在制冷器中冷卻至（0±2）℃，讓離心管及其內(nèi)容物在將離心管放回制冷器，在（0±1）℃繼續(xù)放置7d。7d后，將離心管取出，在室溫（不超過20℃）下靜置3h，離心分離15min(管子頂部相對離心力500～600G，G為重力速度)，記錄管子底部離析物的體積（至0.05ml）。離析物不超過0.3ml為合格。

2.7 熱貯穩(wěn)定性

2.7.1方法提要

  將試樣至于安瓿瓶中，于54℃貯存14d后，對規(guī)定項(xiàng)目進(jìn)行測定。

2.7.2儀器

  恒溫箱（或恒溫水?。海?span lang="EN-US">54±2）℃；

  安瓿瓶或（54±2）℃仍能密封的具塞玻璃瓶：50ml；

醫(yī)用注射器：50ml；

2.7.3 測定步驟

  用注射器將30ml試樣，注入潔凈的安瓿瓶中（避免試樣接觸瓶頸），置此安瓿瓶于冰鹽浴中制冷，用高溫火焰迅速封口（避免溶劑揮發(fā)），至少封3瓶。冷卻至室溫分別稱重。將封好的安瓿瓶置于金屬容器中，再將金屬容器放入（54±2）℃恒溫箱（或恒溫水浴中），放置14d。取出，冷至室溫，將安瓿瓶外面擦拭干凈后分別稱重，質(zhì)量未發(fā)生變化的試樣，于24h內(nèi)按奔標(biāo)準(zhǔn)2.3規(guī)定的方法對有效成分含量進(jìn)行測定。新狼毒素A相對分解率不大于5.0%為合格。