通用名稱：骨骼肌受體酪氨酸激酶自身抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名稱：MuSK-Ab ELISA

產(chǎn)品規(guī)格：96T

musk試劑盒預(yù)期用途

musk試劑盒可定性和定量檢測(cè)人血清中抗骨骼肌受體酪氨酸激酶自身抗體。僅用于科研使用。

前言簡(jiǎn)介

重癥肌無(wú)力（MG）是由于自身抗體作用使神經(jīng)肌肉傳遞失敗而導(dǎo)致的。大約80—90%的廣義MG病人均有肌肉煙堿型乙酰膽堿受體的自身抗體。這些抗體會(huì)導(dǎo)致乙酰膽堿受體數(shù)量減少和功能的喪失，并導(dǎo)致神經(jīng)肌肉傳遞失敗—肌無(wú)力。10—20%的廣義重癥肌無(wú)力病人和多達(dá)50%的眼肌型重癥肌無(wú)力患者無(wú)法檢測(cè)到乙酰膽堿受體抗體。這種情況通常被稱為血清反應(yīng)陰性的重癥肌無(wú)力。血清反應(yīng)陰性的重癥肌無(wú)力已被認(rèn)為是一種抗體介導(dǎo)的疾病。

骨骼肌特異性受體酪氨酸激酶抗體（MuSK-Ab）已證實(shí)存在于廣義的血清反應(yīng)陰性的重癥肌無(wú)力病人的血清中（大約40%血清反應(yīng)陰性的MG病人）。MuSK是一種集聚蛋白受體復(fù)合物的一部分并且在突觸形成過程中誘導(dǎo)乙酸膽堿受體的聚集，而且Musk也在成熟神經(jīng)肌肉接點(diǎn)（NMJ）表達(dá)。華南生物工程有限公司Musk MG病人大多數(shù)為女性，有顯著的頭顱和累及延髓與其他形式的MG相比會(huì)有更高的風(fēng)險(xiǎn)。疾病的發(fā)作往往在早期，大多數(shù)病人在30-40歲出現(xiàn)癥狀。檢測(cè)MuSK抗體非常有助于診斷和臨床管理MG病人。

musk試劑盒檢測(cè)原理

musk試劑盒是利用固相酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)試驗(yàn)（ELISA）。包被孔中包被了抗原。病人樣本中的抗體連結(jié)到包被孔中的抗原，并通過信號(hào)放大系統(tǒng)檢測(cè)出來。顯色反應(yīng)是通過結(jié)合到抗體的堿性磷酸酶催化的。生成的顏色強(qiáng)度與樣本中相應(yīng)抗體濃度成正比關(guān)系。定性或者定量結(jié)果分別通過臨界質(zhì)控或者標(biāo)準(zhǔn)曲線得到。

musk試劑盒組成成分

需要的材料（未提供）

1)  移液器，體積5、10、20、50、100、1000μL

2)  一次性的玻璃管(12×75 mm)

3)  聚丙烯（PP）管（例如Sarstedt）

4)  旋渦混合器

5)  溫育箱，37℃

6)  8通道的移液器，帶加樣槽

7)  洗瓶、自動(dòng)或者半自動(dòng)洗板機(jī)

8)  酶標(biāo)儀

9)  雙蒸水或去離子水

10) 吸水紙、吸嘴和秒表

儲(chǔ)存條件

musk試劑盒和運(yùn)輸環(huán)境和儲(chǔ)存環(huán)境溫度為2-8℃，避免熱源或太陽(yáng)直射。樣品的儲(chǔ)存與穩(wěn)定性及試劑的準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述。開封的試劑盒在有效期內(nèi)穩(wěn)定，前提是要將試劑盒用袋子密封并儲(chǔ)存于2-8℃的環(huán)境下。

樣本要求

血清

遵從靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項(xiàng)。從采集血液樣品的那一刻起到檢測(cè)時(shí)都應(yīng)保持血液樣品的化學(xué)整體性。不要使用明顯溶血、黃疸血和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁，則在實(shí)驗(yàn)前應(yīng)當(dāng)離心以除去所有的微粒物質(zhì)。

檢測(cè)方法

凍干或者濃縮成分的制備

樣本的稀釋

musk試劑盒檢測(cè)步驟

1、移取100μL的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和稀釋的病人樣本至相應(yīng)的微孔中，蓋板

2、在定軌搖床上（500rpm）室溫（18-25℃）溫育60分鐘

3、棄去孔中溶液。使用稀釋的洗滌液每次250μL洗板3次，在吸水紙上拍干

4、每孔加入100μL抗血清，蓋板

5、在定軌搖床上（500rpm）室溫（18-25℃）溫育60分鐘

6、棄去孔中溶液。使用稀釋的洗滌液每次250μL洗板3次，在吸水紙上拍干

7、每孔加入100μL已稀釋的酶聯(lián)物，蓋板

8、在定軌搖床上（500rpm）室溫（18-25℃）溫育60分鐘

9、棄去孔中溶液。使用稀釋的洗滌液每次250μL洗板3次。在吸水紙上拍干

10、加底物液和終止液建議使用8通道移液器。移取底物液和終止液應(yīng)該為相同的時(shí)間間隔。避免氣泡的生成

11、每孔加入100μLPNPP底物液。輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)板混勻溶液

12、在室溫（18-25℃）溫育30分鐘

13、每孔加入100μL PNPP終止液終止顯色反應(yīng)。輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)板混勻溶液

14、在405nm處檢測(cè)吸光度（參考波長(zhǎng)為600—650nm），應(yīng)在加入終止液后60分鐘內(nèi)讀數(shù)

結(jié)果計(jì)算

質(zhì)量控制

該實(shí)驗(yàn)結(jié)果只有在按照說明書操作才有效。此外，使用者必須嚴(yán)格按照GLP規(guī)范或者其他適合的準(zhǔn)則/法律。所有的試劑盒質(zhì)控品必須在標(biāo)簽和QC證書的可接受范圍內(nèi)。如果不符合該條件，則實(shí)驗(yàn)無(wú)效并需要重做。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)使用已知的樣本作為進(jìn)一步的質(zhì)控。建議進(jìn)行適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量評(píng)價(jià)試驗(yàn)。

如果有任何的偏差，以下的技術(shù)問題應(yīng)給予證實(shí)：試劑的有效期、保存條件、移液器、設(shè)備、溫育條件和洗滌方法。

定性評(píng)價(jià)

標(biāo)準(zhǔn)品B（臨界標(biāo)準(zhǔn)品）的吸光度為臨界值（CO）。通過樣本的平均吸光度比臨界值可以計(jì)算臨界指數(shù)（COI），樣本的吸光度更高的為陽(yáng)性，樣本吸光度低的為陰性。

例如：

臨界值（標(biāo)準(zhǔn)品B吸光度）=0.23

樣本OD值=0.7

臨界指數(shù)（COI）：0.70/0.23=3.04。樣本應(yīng)被認(rèn)為是陽(yáng)性。

定量評(píng)價(jià)

以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸（線性），相應(yīng)的濃度為X軸（對(duì)數(shù)）在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙或者自動(dòng)分析軟件上作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，使用三次樣條函數(shù)、4參數(shù)或者Logit-Log可以得到良好的擬合度。

計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)該使用每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值（在重復(fù)檢測(cè)中一個(gè)明顯的異常值應(yīng)忽略而采用一個(gè)更可靠的單值）。