一 產品規(guī)格
1)用于分子量在5,000以下的化合物分離(微孔徑8nm、12nm)
色譜柱 | 基材 | 微孔徑(nm) | 含碳率(%) | pH范圍 | 特點及用途 |
Pro C18 | 硅膠 | 12 | 16 | 2.0-8.0 | l 通用性較高的標準型ODS l 通過獨自的合成方法進行了高度的非化處理 l 對于堿性化合物的分離良好 |
Hydrosphere C18 | 12 | 12 | l 對于親水性化合物的分離良好 l 可以用于100%水性流動相 | ||
Pro C18 RS | 8 | 22 | 1.0-10.0 | l 的耐酸、耐堿性 l 對于堿性化合物分離良好 l 對于疏水性大的化合物分離十分良好 | |
ODS-A | 12 | 17 | 2.0-7.5 | l 適用于從分析到大量制備的通用型ODS | |
ODS-AQ | 12 | 14 | l 對于親水性化合物的分離良好 | ||
Ph | 12 | 9 | l 通過π電子相互作用顯示出與ODS相異選擇性 | ||
Polymer C18 | 聚合物 | - | - | 2.0-13.0 | l 聚合物類C18 |
2)用于分子量在5,000~100,000左右的化合物分離(微孔徑20nm、30nm)
色譜柱 | 基材 | 微孔徑(nm) | 含碳率(%) | pH范圍 | 特點及用途 |
ODS-A | 硅膠 | 20 | 12 | 2.5~7.5 | l 微孔徑大的ODS l 用于蛋白質、多肽的分離 |
30 | 7 | ||||
ODS-AQ | 20 | 10 | l 低碳ODS | ||
C8 | 20 | 7 | l 微孔徑大的C8 l 對于疏水性相對較高的化合物的分離良好 | ||
30 | 4 | ||||
20 | 5 | l 微孔徑大的 l 對于蛋白質的分離良好 | |||
30 | 3 | ||||
CN | 30 | 3 | l 氰基的固有選擇性 l 用于疏水性大的蛋白質分離 | ||
YMCbasic | 20 | 7 | l 對于蛋白質、多肽的分離良好 l 對胰島素具有的分離能力 | ||
Protein-RP | 20 | 4 | 1.5~7.5 | l 用于耐酸性很好的蛋白質、多肽的分離 |
二 產品應用
1)多肽(MW573-3,465)的分離
通常用于多肽以外的低分子化合物分離的C18(12nm)色譜柱,也同樣適合分子量在5,000以下的多肽分離。尤其對于堿性多肽的分離,實施了高度非化處理的Pro系列柱十分。
如上圖所示,其它公司的親水化合物分離用ODS柱(Brand E2)對堿性多肽(1和7的色譜峰)顯示出拖尾。對此,Hydrosphere C18則顯示出良好的分離和的峰形。
2)多肽分析
下圖是β-乳球蛋白B的胰蛋白酶消化物的分析例。
由圖可見:對于像多肽圖析這樣的多個多肽的同步微量分析,C18(12nm)的半微米型柱十分。是YMC-Ultra HT Pro C18 12um柱與5um柱相比,由于其分離能力很高,因此檢測出的峰數(shù)和靈敏度都有所增加。
3)多肽及蛋白質(MW4,300-17,000)的分離
為考察因微孔徑及官能團的不同而造成對分離的影響。下圖對于分子量在4,300至17,000的多肽及蛋白質,通過微孔徑和官能團各不相同的色譜柱進行了分離比較。
因微孔徑不同而造成的影響 因官能團不同而造成的影響
的微孔徑和官能團的組合
由上圖可見:填料的微孔徑和官能團之中的一項沒有化時,也會發(fā)生峰變寬、化合物之間或不純物峰間的分離不良等現(xiàn)象。
4)蛋白質(MW66,000-96,000)的分離
a) 因分離液的不同而造成對分離的影響(,30nm)
在分離蛋白質和多肽時,分離液一般采用含有TFA的乙腈和水的梯度洗脫。
從上圖可見:使用(30nm)柱的高分子蛋白質的分離中,因用于分離液的溶劑的不同會表現(xiàn)出對分離模式的影響。如上圖中,對于在乙腈和水性流動相里分離的樣品,由于添加了2-丙醇等不同種類的溶劑而使選擇性發(fā)生了變化,有時會變得可以分離
b) 因微孔徑及官能團的不同而造成對分離的影響
因微孔徑不同而造成的影響 因官能團不同而造成的影響
從上圖可見:在分離對象化合物分子量在66,000至96,000那樣的高分子蛋白質分離中,隨著微孔徑變小峰形會變寬,分離變得不良。
另外,對于填料的官能團,隨著C8、C18和側鏈疏水性變大,分離會變得不良。像這種填料的微孔徑和官能團不適合樣品的分子大小的情況發(fā)生時,峰形會惡化。對于分子量在20,000~100,000左右的蛋白質的分離,選擇微孔徑大、官能團疏水性大小的(30nm)柱較為適合。
5)核酸堿基、核苷酸的分離
Hydrosphere C18是適合于親水性化合物分離的色譜柱,即使在100%水性流動相的條件下也能夠使用。對親水性高的核酸堿基和核苷酸等低分子核酸類的分離。
6)寡核苷酸的分離
下圖是采用色譜柱Hydrosphere C18對寡核苷酸的分離。由下圖可見:適合于親水性化合物分離的Hydrosphere C18在寡核苷酸分離中,即使在三易基胺濃度很低的分離液條件下也能獲得良好的分離。
7)寡核苷酸的分離精煉
下圖是采用YMC分析柱Hydrosphere C18(50*4.6mm I.D.)和制備柱YMC-Aus Hydrosphere C18(50*20mm I.D.)分析合成的30 mer寡核(5′-CCGCGAGAAAAAAAGCGTGTTACC-3)。
分析1.0mL /min, 5uL injeion;制備提煉 19mL /min, 100uL injeion
由上圖可見:Hydrosphere C18可以分離鏈長上1殘基不同的寡核苷酸,對于目標物和不純物的分離也良好。另外,YMC的制備柱具有與分析柱同等的率,可以在不損壞分離的前提下擴大從分析到制備的規(guī)模。為此可以在高回收率下進行的制備提純。