蛋白質(zhì)印跡技術(shù)原理優(yōu)質(zhì)蛋白印跡儀
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蛋白質(zhì)印跡技術(shù)原理及進(jìn)展:
蛋白質(zhì)印跡(Western Blot),是根據(jù)原體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。由于Western Blot具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)級聯(lián)反應(yīng)中,應(yīng)用Western blotting技術(shù)來檢測化學(xué)修飾(磷酸化與去磷酸化),蛋白質(zhì)表達(dá)量或者狀態(tài)。
與Southern或rthern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質(zhì),“探針”是體,“顯色”用標(biāo)記的二。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為原,與對應(yīng)的體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。
現(xiàn)在western blot中高靈敏度的化學(xué)發(fā)光檢測、準(zhǔn)確定量蛋白、自動化操作和CCD成像系統(tǒng)已經(jīng)普及,目前的發(fā)展趨勢是多通道熒光檢測。Bio-Rad公司已研發(fā)出一款集普通成像、化學(xué)發(fā)光成像、多通道熒光成像和Stain Free免染技術(shù)于一體的型成像系統(tǒng)Chemi Doc MP,具有的靈敏度、杰出的圖像質(zhì)量、無可匹敵的應(yīng)用廣泛性、系統(tǒng)操作簡單快捷等優(yōu)點(diǎn)。
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