雞IgG測試劑盒

一、產(chǎn)品名稱

通用名：雞傳支IgG測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for chicken Antibodies to Infectious Bronchitis Virus(ELISA)

二、包裝規(guī)格  96T×1/盒、96T×2/盒

三、預(yù)期用途  雞（InfectiousBronchitis，IB）是由引起雞的一種急性、高度接觸呼吸道，本病呈世界性分布，是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疫病之一。疫苗免疫是和控制雞發(fā)生的途徑，而免疫后體水平的高低反映實際的疫苗免疫效果，直接關(guān)系到免疫雞群對禽的力。

    雞傳支IgG測試劑盒適用于：雞血清體的檢測，以確定被檢雞是否感染過雞或免疫雞體內(nèi)體水平；評估雞群感染IBV的風(fēng)險程度；了解雛雞母源體水平，為IBV免疫程序的制定提供參考。

四、試劑盒原理

    雞傳支IgG測試劑盒系由預(yù)包被雞（IBV）重組N蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中雞特異性體。實驗時，在酶標板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有雞的特異性體，則將與酶標板上原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的體和其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上原體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加T底物液，與酶反應(yīng)形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有特異性體。

五、雞傳支IgG測試劑盒組成

酶標板、酶標記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對照、陰性對照

六、儲存及期

于2～8℃避光保存，期為12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

七、適用儀器  含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

雞傳支IgG測試劑盒操作步驟

一、樣品準備

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如2μl血清加入198μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。

二、檢驗方法  

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設(shè)空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘。

5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。

6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

結(jié)果分析

一、參考值

實驗正常的情況下，陰性對照≤0.10，陽性對照≥0.6。

二、檢驗結(jié)果的解釋

1.C.O（臨界值）=0.13+陰性對照孔均值（陰性對照孔均值低于0.07時以0.07計算）。

2.未曾免疫雞群：樣品A值≥C.O為陽性；樣品A值＜C.O為陰性。

3.免疫雞群：監(jiān)測并記錄樣本當(dāng)時的體水平，根據(jù)結(jié)果分析體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動向。