一、 原理  本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測水產(chǎn)和雞肉等組織樣本中的硝呋索爾，在微孔條上預(yù)包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來進(jìn)行的，樣本中的硝呋索爾和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗硝呋索爾衍生物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣品中的硝呋索爾含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出硝呋索爾含量。 二、 試劑盒技術(shù)指標(biāo)：試劑盒靈敏度：  0.1ppb樣本檢測下限：組織、蜂蜜         0.2ppb魚/蝦等水產(chǎn)品組織因存在一定的干擾，檢測下限為0.3ppb回收率：魚/蝦水產(chǎn)組織    90%±15%蜂蜜/雞肉/肝臟樣本  80%±15%交叉反應(yīng)率：硝呋索爾代謝物  100%呋喃唑酮代謝物  ﹤0.1%呋喃妥因代謝物﹤0.1%呋喃西林代謝物﹤0.1% 三、試劑盒組成1．微量測試孔：96T/8孔2．標(biāo)準(zhǔn)品液： 0ppb  0.1 ppb  0.3ppb  0.9ppb  2.7ppb  8.1ppb （1ml/瓶）3．酶標(biāo)記物                12ml4．抗體工作液              7ml5．底物緩沖液              7 ml6．底物液                  7 ml7．終止液                  7 ml8．20倍濃縮洗滌液         50 ml9．復(fù)溶液                  50 ml10．15.1mg衍生化試劑 四、 所用儀器、試劑具備的儀器：  微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g） 微量移液器：  單道20μl-200μl，100μl-1000μl、多道250μl試       劑：  甲醇、氫氧化鈉、乙酸乙酯、正己烷、濃HCl、磷酸氫二鉀、鄰硝基苯甲醛、亞硝基鐵氰化鉀（K₂Fe（CN）₅·NO·3H₂O）ZnSO₄·7H₂O 五、樣本前處理步驟樣本處理前須知處理任何樣本時(shí)，都必須注意：（a）實(shí)驗(yàn)中必須使用性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。樣本前處理需配制：1．衍生化試劑 稱15.1mg鄰硝基苯甲醛加甲醇10ml溶解(濃度10mM)2．C液：（供奶樣用）稱12.5g亞硝基鐵氰化鉀用去離子水定溶至100ml。      D液：（供奶樣用）稱29.8g 硫酸鋅用去離子水溶解定溶至100ml。3．0.1M K₂HPO₄ 稱22.8g K₂HPO₄·3H₂O加去離子水溶解定溶至1L4．1M HCl取8.6ml濃HCl加水定溶至100ml。5．1M NaOH稱取4g NaOH加水定溶至100ml。樣本的處理(a) 肉樣或魚蝦用均質(zhì)器均質(zhì)樣本,接（d）的描述方法(b) 奶樣1. 取出5ml的奶樣本到玻璃離心管中,分別加入C液和D液各250μl。2. 用振蕩器充分混合樣本,用恒溫離心機(jī)4000r/min以上離心10min(4-12℃).若沒有恒溫離心機(jī),則先將樣本降溫至大約8℃,然后離心。3. 接(d)的描述方法(c) 蜂蜜  1. 取1±0.05g樣本到離心管中。2. 加入4ml的去離子水溶解,再加入0.5ml 1M HCl和100μl衍生化試劑,充分振蕩。3. 接(d)第2步描述方法(d)接上面的方法1. 取1±0.05g的均質(zhì)樣本(肉樣/魚蝦)、牛奶的離心上清液1.1ml（相當(dāng)1ml奶樣），分別加入4ml的去離子水，0.5ml 1M HCl和100μl衍生化試劑，充分振蕩。2. 置于56℃環(huán)境中孵育（2h）。3. 分別加入5ml 0.1M K₂HPO_4， 0.4 ml 1M NaOH和5ml的乙酸乙酯，充分振蕩30s；4. 在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min。5. 取出2.5ml的乙酸乙酯到另一潔凈容器中于50℃氮?dú)?空氣吹干。    6. 用1ml正己烷溶解干燥物，用1ml已稀釋好的復(fù)溶液充分混合；在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min。7. 取50μl下層相用于分析。樣本稀釋倍數(shù)：2