LightScanner 32 (LS32)由美國(guó)Idaho公司生產(chǎn)，是同時(shí)具有高分辨率溶解曲線和定量PCR雙重功能的分析系統(tǒng)，是目前世界上快速的實(shí)時(shí)定量PCR儀器。它采用空氣熱循環(huán)技術(shù)，可以自動(dòng)對(duì)目的核酸進(jìn)行分析。 LightScanner 32 每次可以分析 32 個(gè)樣品，并且所需的時(shí)間不超過(guò) 60 分鐘。
LS32 儀器是三色實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)和高分辨率熔解曲線分析功能的整合。通過(guò)采用一系列標(biāo)記的探針如 SimpleProbes, FRET probes 和 HybProbe ，儀器可以用來(lái)進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR ，當(dāng)采用 LCGreen Plus 染料時(shí)，儀器可以產(chǎn)生理想的高分辨率的熔解曲線用來(lái)分析。
該系統(tǒng)包括計(jì)算機(jī)控制，并且在電腦上已經(jīng)預(yù)先安裝好了便于操作和分析的軟件。該軟件可以自動(dòng)的收集和解釋數(shù)據(jù)，并且將分析好的結(jié)果以的形式產(chǎn)生。
溫度控制
LS32 的溫度控制由處在循環(huán)室內(nèi)的溫度傳感器來(lái)控制調(diào)節(jié)。周圍環(huán)境的空氣由進(jìn)氣風(fēng)扇吸入，產(chǎn)生正壓力后，使得空氣通過(guò)加熱管道進(jìn)入反應(yīng)室內(nèi)?？諝庠诩訜峁艿赖哪┒擞杉訜峋磉M(jìn)行加熱，然后由第二個(gè)風(fēng)扇將空氣分散在小室內(nèi)。冷卻過(guò)程以同樣的方式進(jìn)行——將未被加熱的空氣抽入到小室中來(lái)冷卻樣品。
這種方法是目前為止世界上迅速的改變 PCR 反應(yīng)溫度的方法，使得 PCR 反應(yīng)可以在 15 至 20 分鐘之內(nèi)完成。
熒光計(jì)的組成
一個(gè)三通道的熒光計(jì)模塊用于實(shí)時(shí)檢測(cè)每個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)過(guò)程中的染料或者探針。熒光計(jì)中的三個(gè)通道可以同時(shí)讀取并記錄每個(gè)樣品中所獲得的熒光。每個(gè)樣品的激發(fā)是由一個(gè) LED 發(fā)射的光通過(guò)調(diào)諧后的濾光器，由二向色鏡產(chǎn)生的 470 nm 處的波長(zhǎng)激發(fā)的。三種檢測(cè)通道也都是經(jīng)過(guò)濾光器的，產(chǎn)生波長(zhǎng)分別為 530 nm, 640 nm, 和 710 nm 的光波
為了激發(fā)熒光，每個(gè)儀器都配備有一個(gè) LED 光源。這種 LED 光源不需要維護(hù)并且有相當(dāng)長(zhǎng)的壽命。熒光計(jì)有三個(gè)通道，可以檢測(cè)波長(zhǎng)變化的發(fā)射光。 由于高質(zhì)量的光學(xué)性能，使得測(cè)量變得非常的迅速和靈敏。在普通的擴(kuò)增過(guò)程中，對(duì)于一個(gè)樣品的測(cè)量一般只需要 20 毫秒。
高分辨率熔解曲線分析
LightScanner32熒光定量PCR集成了美國(guó)Idaho公司先進(jìn)的高分辨溶解曲線功能（HRM），在染料 LCGreen Plus 的幫助下，高分辨率熔解曲線分析可以鑒別出 PCR 產(chǎn)物中雜合的單堿基突變。這種方法比起普通的技術(shù)來(lái)說(shuō)有更好的靈敏性和特異性。采用這種方法進(jìn)行的突變的檢測(cè)不依賴于突變?cè)谄沃兴诘奈恢?。?dāng)片段的大小在 400 bp 或者更小時(shí)，靈敏性。
除了能鑒定出未知的雜合突變，高分辨率熔解曲線還可以被用來(lái)鑒定特定位點(diǎn)的突變，在這種情況下，掃描未知突變和進(jìn)行基因分型可以結(jié)合在一起，使得分析更為簡(jiǎn)單。對(duì)于目前絕大多數(shù)的突變分析方法來(lái)說(shuō)，都很難鑒定出純合子序列突變。在一些不同種類的小的擴(kuò)增片段中，高分辨率熔解曲線則顯示出了鑒定純合子序列突變的能力。這種方法能鑒定出大多數(shù)的純合突變，但不能保證可以鑒定出所有的純合突變。
在 LS32 系統(tǒng)中，高分辨率熔解曲線分析是在完成 PCR 反應(yīng)之后開始的。溫度控制的熔解發(fā)生器在樣品下方，通過(guò)一種被保護(hù)的方式上升到毛細(xì)管處，然后對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行熱變性。同時(shí)也自動(dòng)收集高密度的熒光數(shù)據(jù)。
當(dāng)達(dá)到目標(biāo)變性溫度以后，熔解發(fā)生器會(huì)下降從而和樣品分離，同時(shí)由高速風(fēng)扇對(duì)其降溫。該過(guò)程不斷的重復(fù)直到所有的樣品都被熔解。然后加熱裝置下降，啟動(dòng)冷卻過(guò)程，隨后移動(dòng)到另一個(gè)毛細(xì)管處
LS32 有為卓越的控溫能力和數(shù)據(jù)采集速度。 LS32 極好的靈敏度和特異性幾乎可以滿足所有掃描未知突變和進(jìn)行基因分型的工作。
LS32 儀器是三色實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)和高分辨率熔解曲線分析功能的整合。通過(guò)采用一系列標(biāo)記的探針如 SimpleProbes, FRET probes 和 HybProbe ，儀器可以用來(lái)進(jìn)行實(shí)時(shí)定量 PCR ，當(dāng)采用 LCGreen Plus 染料時(shí)，儀器可以產(chǎn)生理想的高分辨率的熔解曲線用來(lái)分析。
該系統(tǒng)包括計(jì)算機(jī)控制，并且在電腦上已經(jīng)預(yù)先安裝好了便于操作和分析的軟件。該軟件可以自動(dòng)的收集和解釋數(shù)據(jù)，并且將分析好的結(jié)果以的形式產(chǎn)生。
溫度控制
LS32 的溫度控制由處在循環(huán)室內(nèi)的溫度傳感器來(lái)控制調(diào)節(jié)。周圍環(huán)境的空氣由進(jìn)氣風(fēng)扇吸入，產(chǎn)生正壓力后，使得空氣通過(guò)加熱管道進(jìn)入反應(yīng)室內(nèi)?？諝庠诩訜峁艿赖哪┒擞杉訜峋磉M(jìn)行加熱，然后由第二個(gè)風(fēng)扇將空氣分散在小室內(nèi)。冷卻過(guò)程以同樣的方式進(jìn)行——將未被加熱的空氣抽入到小室中來(lái)冷卻樣品。
這種方法是目前為止世界上迅速的改變 PCR 反應(yīng)溫度的方法，使得 PCR 反應(yīng)可以在 15 至 20 分鐘之內(nèi)完成。
熒光計(jì)的組成
一個(gè)三通道的熒光計(jì)模塊用于實(shí)時(shí)檢測(cè)每個(gè)擴(kuò)增反應(yīng)過(guò)程中的染料或者探針。熒光計(jì)中的三個(gè)通道可以同時(shí)讀取并記錄每個(gè)樣品中所獲得的熒光。每個(gè)樣品的激發(fā)是由一個(gè) LED 發(fā)射的光通過(guò)調(diào)諧后的濾光器，由二向色鏡產(chǎn)生的 470 nm 處的波長(zhǎng)激發(fā)的。三種檢測(cè)通道也都是經(jīng)過(guò)濾光器的，產(chǎn)生波長(zhǎng)分別為 530 nm, 640 nm, 和 710 nm 的光波
為了激發(fā)熒光，每個(gè)儀器都配備有一個(gè) LED 光源。這種 LED 光源不需要維護(hù)并且有相當(dāng)長(zhǎng)的壽命。熒光計(jì)有三個(gè)通道，可以檢測(cè)波長(zhǎng)變化的發(fā)射光。 由于高質(zhì)量的光學(xué)性能，使得測(cè)量變得非常的迅速和靈敏。在普通的擴(kuò)增過(guò)程中，對(duì)于一個(gè)樣品的測(cè)量一般只需要 20 毫秒。
高分辨率熔解曲線分析
LightScanner32熒光定量PCR集成了美國(guó)Idaho公司先進(jìn)的高分辨溶解曲線功能（HRM），在染料 LCGreen Plus 的幫助下，高分辨率熔解曲線分析可以鑒別出 PCR 產(chǎn)物中雜合的單堿基突變。這種方法比起普通的技術(shù)來(lái)說(shuō)有更好的靈敏性和特異性。采用這種方法進(jìn)行的突變的檢測(cè)不依賴于突變?cè)谄沃兴诘奈恢?。?dāng)片段的大小在 400 bp 或者更小時(shí)，靈敏性。
除了能鑒定出未知的雜合突變，高分辨率熔解曲線還可以被用來(lái)鑒定特定位點(diǎn)的突變，在這種情況下，掃描未知突變和進(jìn)行基因分型可以結(jié)合在一起，使得分析更為簡(jiǎn)單。對(duì)于目前絕大多數(shù)的突變分析方法來(lái)說(shuō)，都很難鑒定出純合子序列突變。在一些不同種類的小的擴(kuò)增片段中，高分辨率熔解曲線則顯示出了鑒定純合子序列突變的能力。這種方法能鑒定出大多數(shù)的純合突變，但不能保證可以鑒定出所有的純合突變。
在 LS32 系統(tǒng)中，高分辨率熔解曲線分析是在完成 PCR 反應(yīng)之后開始的。溫度控制的熔解發(fā)生器在樣品下方，通過(guò)一種被保護(hù)的方式上升到毛細(xì)管處，然后對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行熱變性。同時(shí)也自動(dòng)收集高密度的熒光數(shù)據(jù)。
當(dāng)達(dá)到目標(biāo)變性溫度以后，熔解發(fā)生器會(huì)下降從而和樣品分離，同時(shí)由高速風(fēng)扇對(duì)其降溫。該過(guò)程不斷的重復(fù)直到所有的樣品都被熔解。然后加熱裝置下降，啟動(dòng)冷卻過(guò)程，隨后移動(dòng)到另一個(gè)毛細(xì)管處
LS32 有為卓越的控溫能力和數(shù)據(jù)采集速度。 LS32 極好的靈敏度和特異性幾乎可以滿足所有掃描未知突變和進(jìn)行基因分型的工作。
