嘔吐毒素（Deoxynivalenol）ELISA檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品名稱：嘔吐毒素ELISA檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述：脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)又稱嘔吐毒素(vomitoxin)，主要是由鐮刀菌的某些種產(chǎn)生的化學(xué)結(jié)構(gòu)和生物活性相似的有毒代謝產(chǎn)物——單端孢霉烯族化合物中的一種。DON 的主要產(chǎn)生菌是禾谷鐮刀菌(Fusariumgraminearum)，DON廣泛存在于，主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物，也污染糧食制品，人和動(dòng)物在誤食被該毒素污染的糧谷類后可以產(chǎn)生廣泛的毒性效應(yīng)。近年來發(fā)現(xiàn)DON可能與人類食管癌、IgA腎病有關(guān)，對(duì)人類及動(dòng)物的健康構(gòu)成威脅。DON屬于劇毒或中等毒物，人畜攝入了被DON污染的食物／飼料后，會(huì)導(dǎo)致厭食、嘔吐、腹瀉、發(fā)燒、站立不穩(wěn)、反應(yīng)遲鈍等急性中毒癥狀，嚴(yán)重時(shí)損害造血系統(tǒng)造成死亡。研究表明，DON可能對(duì)免疫系統(tǒng)有影響，有明顯胚胎毒性和一定致畸作用，可能有遺傳毒性，但無致癌、致突變作用。由于DON的危害嚴(yán)重，引起了各國的普遍重視。谷物及飼料中DON的含量有嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。我國谷物中DON 的限量標(biāo)準(zhǔn)為1．0 mg／kg 。因此，有必要對(duì)其進(jìn)行有效的監(jiān)控。HPLC或GC-MS用作檢測(cè)嘔吐毒素的方法，但是其前處理步驟繁瑣，費(fèi)用昂貴。酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒則可經(jīng)濟(jì)、快速地檢測(cè)嘔吐毒素。

適用范圍

嘔吐毒素ELISA檢測(cè)試劑盒可定性、定量測(cè)定大米、小米、面等谷物和飼料中的嘔吐毒素。

試驗(yàn)原理

 嘔吐毒素ELISA檢測(cè)試劑盒采用競爭ELISA，在微孔板上預(yù)包被嘔吐毒素抗原，加入樣本/嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品溶液及辣根過氧化物酶標(biāo)記的嘔吐毒素抗體。樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的嘔吐毒素與預(yù)包被在板孔上的嘔吐毒素抗原競爭結(jié)合辣根過氧化物酶標(biāo)記的嘔吐毒素抗體，與樣本或標(biāo)準(zhǔn)品溶液中的嘔吐毒素結(jié)合的酶標(biāo)抗體在洗滌時(shí)被除去。再加入TMB顯色，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物嘔吐毒素抗原的含量成負(fù)相關(guān)。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可得出相應(yīng)殘留物嘔吐毒素的含量。

試劑配制

1、洗滌工作液：用去離子水將濃縮洗滌液按1:9體積比進(jìn)行稀釋（1份濃縮洗滌液+9份去離子水）。

2、樣品提取液：用去離子水將濃縮樣品提取液按1:9體積比       進(jìn)行稀釋（1份濃縮樣品提取液+9份去離子水）。

操作步驟

1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。

2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放進(jìn)原錫箔袋中并且與提供的干燥劑一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷凍。

3、洗滌工作液在使用前也需回溫。

4、將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50ml到對(duì)應(yīng)的微孔中，加入稀釋好酶標(biāo)物50ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境中反應(yīng)15min。

6、小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液300ml/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干。

7、加入顯色液100ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫避光環(huán)境反應(yīng)15min。

8、加入終止液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔OD值。

注意事項(xiàng)

1.  室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。

2.  在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

3.  每加一種試劑前需將其搖勻。

4.  反應(yīng)終止液為2M鹽酸，避免接觸皮膚。

5.  不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。

6.  儲(chǔ)存條件：

7.  保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。

8.  試劑變質(zhì)的跡象：

9.  發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。

10.  在加入顯色液后，一般顯色時(shí)間為20～30min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時(shí)間到35min（或更長），但不得超過40min。反之，則減短反應(yīng)時(shí)間。

嘔吐毒素ELISA檢測(cè)試劑盒反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

試劑盒組成

1. 96孔酶標(biāo)板×1塊

2. 標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶：（1ml/瓶）

0ppb, 3ppb, 9ppb, 18ppb, 36ppb,72ppb

3. 酶標(biāo)物1瓶………………………………………… 6ml

4. 顯色液1瓶…………………………………………12ml

5. 終止液………………………………………………6ml

6. 濃縮洗滌液 （10×）………………………………40ml

7. 濃縮樣品提取液（10×）…………………………40ml

貯藏條件及保存期

        貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。

        保存期：嘔吐毒素ELISA檢測(cè)試劑盒有效期為12個(gè)月。

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